细胞是组成自然界生命的基本单位，同时也是重要的生物资源。低温制冷技术的迅速发展，能够做到控制细胞的“生死”，充分利用珍贵的细胞资源。
冻存是长期保存细胞的重要方法，利用冻存技术将细胞置于液氮中保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，细胞进入一种假死状态。
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01
细胞冻存
1. 取对数生长期的细胞移至离心管中。
对数期细胞是细胞增殖过程中活力旺盛的时期，也是冻存细胞的合理时期，对于贴壁细胞先用胰蛋白酶分离成单个细胞再收集到离心管中，悬浮细胞可直接移至离心管中。
2. 离心去除胰蛋白酶及培养液，加入冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀。
3.细胞计数仪计数，调节细胞的终密度。
4. 将细胞分装入冻存管中，在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
5.冻存管放入程序降温盒，放入超低温冰箱中过夜。
对于大多数动物细胞，降温速率通常每分钟下降1至3℃。的方法是使用程序降温系统。其次可以使用程序降温盒，虽然这种方法适用于许多细胞系，但不能提供均匀可控的冷却，不建议用于珍贵细胞。
6.从超低温冰箱中取出程序降温盒，取出冻存管迅速浸入液氮中。
细胞储存应始终保持温度低于-130°C。细胞可以在更高的温度下保存，但生存力通常会随着时间的推移而降低。理想的储存容器是液氮罐，出于安全原因，优选选择气相液氮储存。
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无论使用哪种冻存方法，关键的是快速高效地将其传输到存储位置。如果不能立即完成，可以将小瓶置于干冰上一段时间。这样可以避免在转移过程中发生温度升高而损害细胞，在这个转移过程中温度升高是解冻后影响细胞活力的主要原因。
细胞冻存关键因素：
1.适当的处理及温和收集细胞
2.使用合适的冷冻保护剂
3.细胞冻存的速率
4.合适的储存温度
02
细胞复苏
1.从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.取出冻存管，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并加培养液混匀。
3.离心弃去上清液，加入血清培养液重悬细胞。
4.计数调整细胞密度，放入CO2培养箱静置培养。
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细胞冻存及复苏的基本过程是慢冻快融，这样可以很大限度的保存细胞活力。细胞冻存时向培养基中加入甘油或二甲基亚砜之类的保护剂可使溶液冰点降低，配合使用4℃冰箱和-20℃低温冰箱梯度降温，在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。复苏细胞则采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
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